發(fā)布時(shí)間:2012-03-19
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川芎不同入藥形式的體外溶出與藥效學(xué)比較
劉 莉¹， 徐新剛²， 高 鵬¹， 代 龍¹
（1.山東中醫(yī)藥大 學(xué)，山東 濟(jì)南 250014；2.山東省中醫(yī)藥研究所，山東 濟(jì)南250014）
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關(guān)鍵詞：川芎；超微粉；阿魏酸；鎮(zhèn)痛
摘要：
目的：通過(guò)比較川芎超微粉，細(xì)粉及水提物，醇提物和雙提物的體外阿魏酸溶出量及鎮(zhèn)痛作用。
方法：采用槳法體外溶出實(shí)驗(yàn)、薄層掃描法測(cè)定川芎各入藥形式物中阿魏酸的60min體外溶出量，用扭體法及熱板法比較其鎮(zhèn)痛作用。
結(jié)果：各入藥形式物（3g）中阿魏酸的溶出量分別為超微粉（0.645±0.008）mg，細(xì)粉（0.359±0.005）mg,水提物（0.220±0.004）mg ,醇提物（0.526±0.007）mg,雙提物（0.061±0.003）mg；川芎超微粉的鎮(zhèn)痛效果最好。
結(jié)論：川芎超微粉較細(xì)粉更能增加有效成分的溶出，提高藥效。
中圖分類(lèi)號(hào)：R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1001-1528（2002）04-0246-03
Comparison on dissolution rates in vitro and pharmacodynamics of Rhizoma Chuanxiong
by different forms used as intermediate
LIU Li¹, XU Xin-gang ², GAO Peng¹, DAI Long¹
（1.Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan250014, China；2. Shandong Institute of Traditonal Chinese Medicine, Jinan250014, China）
Key words: Chuanxiong；supper-micronized powder ferulic acid； analgesic effect
Abstact: Objective: To compare the dissolution quantities in vitro of ferulic acid and the analgesic
effect of Rhizoma Chuanxiong by suppermicronized powder, fine powder, water extraction, alcohol extraction
and double extraction.
Methods: Their dissolution rates in vitro were determined by paddle stirring method, the dissolution
quantities of ferulic acid in 60 min were determined by TLCscaning, the analgesic effects were determined
by torsion and hot-plate methods.
Results: The dissolution quantities of ferulic acid were respectively: supper-micronized powder (0.645±0.008) mg，fine powder (0.359±0.005) mg，water extraction (0.220±0.004)mg，alcohol extraction (0.526±0.007) mg，double extraction (0.061±0.003) mg. The analgesic effect of supper-micronized powder of Rhizoma Chuanxiong was the best.
Conclusion: The suppermicronized powder of Chuanxiong improved the dissolution quantity of active
components and improved the potency.
川芎為臨床常用中藥，具有活血行氣、祛風(fēng)止痛的功效，主要用于月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉痛經(jīng)、頭痛、風(fēng)濕痹痛等癥〔1〕。其成方制劑以治療疼痛癥較多。目前多應(yīng)用全粉入藥或水、醇等提取入藥。為探討其科學(xué)合理的用藥形式，我們通過(guò)體外溶出試驗(yàn)，比較了川芎超微粉、細(xì)粉兩種粉碎工藝及水提、醇提和雙提3種提取工藝中阿魏酸的體外溶出量，并進(jìn)行了鎮(zhèn)痛作用的藥效學(xué)比較試驗(yàn)，結(jié)果超微粉和醇提物阿魏酸的溶出量多，鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)。說(shuō)明川芎的正確入藥形式為：若以全粉入藥，超微粉較細(xì)粉更能增加有效成分的溶出，提高藥效。若要減少劑量用藥，則以川芎醇提物入藥為好。
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 儀器
939型薄層自動(dòng)鋪板器（重慶南岸貝爾德儀器技術(shù)廠(chǎng)）；智能溶出試驗(yàn)儀（天津大學(xué)無(wú)線(xiàn)電廠(chǎng)）；CS-9301
薄層掃描儀（日本島津）；82-1型離心機(jī)（上海醫(yī)療器械廠(chǎng)）。
1.2 藥材
川芎藥材購(gòu)自濟(jì)南建聯(lián)中藥店，經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究所生藥室鑒定為傘型科植物川芎Ligus-ticum Chuanxiong Hoort.的干燥根莖。
1.3 試劑
所用試劑均勻?yàn)榉治黾?；阿魏酸?duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）。
1.4 動(dòng)物
昆明種小鼠，♀♂共用，體重18~22g、24~26g，由山東中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。
2 方法和結(jié)果
2.1 樣品制備
2.1.1 川芎細(xì)粉 將川芎粉碎成全部通過(guò)六號(hào)篩的粉末。
2.1.2川芎微粉 將川芎超微粉碎成中心粒徑10µm以下不少于95%的微粉。
2.1.3 川芎水提物 取川芎藥材粉碎成粗粉。稱(chēng)取50g，加水煎煮兩次，第1次10倍量水2h，第2次8倍量水1h，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至稠膏，真空干燥，得干膏18.1g。
2.1.4 川芎醇提物 取川芎藥材粉碎成粗粉，稱(chēng)取50g，加80%乙醇提取2次，每次8倍量，每次2h，濾過(guò)，合并濾液，減壓回收乙醇并濃縮至稠膏，真空干燥，得干膏12.0g。
2.1.5 川芎雙提物 取川芎藥材粉碎成粗粉，稱(chēng)取50g，加水提取揮發(fā)油至盡，收集揮發(fā)油，提取液濾過(guò)，藥渣加水煎煮1h，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮成稠膏，真空干燥，得干膏20.2g。
2.2 溶出液制備
調(diào)節(jié)溶出儀水浴為37℃恒溫，精密量取1000mL人工胃液置溶出儀的燒杯中，于恒溫水浴中保溫，攪拌轉(zhuǎn)速設(shè)為100r·min-1。取粉碎樣品，分別精密稱(chēng)定重量（細(xì)粉、超微粉稱(chēng)取約3g，提取物稱(chēng)取相當(dāng)于原藥材3g的干膏量）每組3份，置測(cè)定儀的燒杯中，人工胃液接觸到樣品時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，1h后，取出液體，2000r·min-1 離心20min。取上清液經(jīng)濾膜過(guò)濾，即得供試溶出液。
2.3 阿魏酸含量測(cè)定
2.3.1 薄層層析及掃描條件 取硅膠G，加0.2%的CMC-Na，自動(dòng)鋪板器鋪成10cm×20 cm×0.03cm的薄層板，105℃活化30min后置干燥器中保存，冷卻后備用。正已烷-氯仿-冰醋酸（8：8：1）展開(kāi)，展距8cm，雙波長(zhǎng)反射式鋸齒掃描，λs=328nm， λR =370nm，色譜圖見(jiàn)圖1
2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制 精密稱(chēng)取阿魏酸對(duì)照品約1mg，以甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至2mL量瓶中，加甲醇并稀釋至刻度搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密吸取1，2，3，4，5µL點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，按上述條件展開(kāi)，取出、晾干，置紫外光下365nm處檢視，定位，測(cè)定，結(jié)果表明阿魏酸在0.5~2.5µg之間上樣量與斑點(diǎn)峰面積積分值呈線(xiàn)形關(guān)系，回歸方程為Y =1124.68X+273.21，r = 0.9992。
2.3.3 樣品測(cè)定 精密吸取溶出液50mL，乙醚提取3次，每次50mL合并乙醚液，揮干，殘?jiān)眉状既芙?，定容?mL量瓶中，作為供試品溶液。精密吸取供試品溶液10µL，對(duì)照品溶液1µL和5µL點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，依法測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。（川芎原藥材中阿魏酸的含量為0.0314%）。
表1 川芎中阿魏酸出量（mg/3g藥材）（n=3）
樣品組 阿魏酸溶出量x±s
川芎超微粉 0.645±0.008
川芎細(xì)粉 0.359±0.005
川芎水提物 0.220±0.004
川芎醇提物 0.526±0.007
川芎雙提物 0.061±0.012
2.4 川芎不同粉碎度的鎮(zhèn)痛作用
2.4.1 對(duì)0.6%醋酸扭體法的鎮(zhèn)痛作用比較♂小鼠60只，體重24~26g，按體重隨機(jī)分為3組，分別給于各藥物組灌胃，1次/日，連續(xù)3日，對(duì)照組給等體積的蒸餾水灌胃，末次給藥后30min，逐只腹腔注射0.6%醋酸（0.1mL/10g鼠重），觀(guān)察注射后出現(xiàn)第一次扭體反應(yīng)的時(shí)間及15min內(nèi)的扭體次數(shù)，并進(jìn)行組間統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果見(jiàn)表2。
2.4.2 對(duì)小鼠熱板法鎮(zhèn)痛作用比較 雌性小鼠60只，體重18~20g，實(shí)驗(yàn)前預(yù)篩痛閾，以痛閾值大于5s，小于30s者為合格，而后隨機(jī)分為3組，分別給藥同2.4.1項(xiàng)，按熱板法〔2〕測(cè)定其痛閾值，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。
表2 川芎不同粉碎度扭體法鎮(zhèn)痛作用比較（x±s）
動(dòng)物數(shù) 第1次扭體反應(yīng) 15min內(nèi)扭體
組別 （只） 潛伏期（min） （次數(shù)）
蒸餾水 20 2.51 ±0.45 30.68 ±3.48
川芎超微粉 20 3.97 ±1.52 21.56 ±5.192)
川芎細(xì)粉 20 3.08 ±0.57 24.65 ±5.491)
川芎水提物 20 2.65 ±0.77 28.72 ±4.21
川芎醇提物 20 2.96 ±0.59 25.23 ±3.761)
川芎雙提物 20 2.81 ±1.34 27.54 ±4.53
與蒸餾水組比較¹P<0.05, ²P<0.01。（下同）
表3 川芎不同粉碎度對(duì)小鼠熱板法的
鎮(zhèn)痛作用比較（x±s）
組別 動(dòng)物數(shù)（只） 痛閥值（s）
蒸餾水 15 16.48 ±4.73
川芎超微粉 14 26.57 ±7.012)
川芎細(xì)粉 14 20.19 ±5.441)
川芎水提物 15 17.21 ±3.54
川芎醇提物 14 20.11 ±4.121)
川芎雙提物 14 18.65 ±2.47
3 小結(jié)和討論
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，川芎的不同粉碎及提取工藝中，超微粉及醇提物中有效成分阿魏酸的溶出量較高，鎮(zhèn)痛作用也較強(qiáng)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，川芎揮發(fā)油中主要成分藁本內(nèi)酯有拮抗子宮收縮的作用〔3〕。有機(jī)酸類(lèi)成分阿魏酸有抗炎和鎮(zhèn)痛作用〔4〕，但受熱易破壞，在川芎水提和雙提工藝中，因?yàn)楦邷睾烷L(zhǎng)時(shí)間的加熱，阿魏酸大量損失。川芎超微粉因藥材細(xì)胞已破壁，更有利于有效成分的溶出，故川芎超微粉與醇提物阿魏酸的溶出量較多，鎮(zhèn)痛作用也較強(qiáng)。另外，其生物堿川芎嗪可較多的透過(guò)血腦屏障，是藥效成分之一〔5〕。但此成分極易受熱破壞，經(jīng)過(guò)加熱提取及濃縮過(guò)程已損失殆盡〔6〕。因沒(méi)有購(gòu)到川芎嗪的對(duì)照品，此部分工作尚需補(bǔ)充。
通過(guò)本次實(shí)驗(yàn)可以看出，川芎醇提取中阿魏酸的溶出量?jī)H次于超微粉，而鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)也證實(shí)醇提法強(qiáng)于水提法及雙提法，僅次于超微粉及細(xì)粉。綜合考慮，我們認(rèn)為在劑型允許原藥材粉入藥的情況下，如散劑、蜜丸等，川芎的入藥形式以超微粉為好，但若為液體制劑或需減少服用劑量的劑型，如滴丸等，川芎入藥形式還是以醇提物為好。
超微細(xì)粉化技術(shù)近年來(lái)應(yīng)用于中藥的研究報(bào)道逐漸增多，它是利用振動(dòng)對(duì)物料進(jìn)行壓縮式粉碎，可將以傳統(tǒng)粉碎工藝得到的原生藥粉末的粒度從150~200目（75μm以下），提高到中心粒徑5~10μm以下，以達(dá)到細(xì)胞破壁的目的。這種新技術(shù)不僅可以全成分保留活性物質(zhì)，而且可以使藥材中的有效成分直接暴露出來(lái)，從而使藥物吸收更加迅速、完全〔7〕。中藥有效成分的溶出與藥物在體內(nèi)的生物利用度之間存在著一定的相關(guān)性〔8,9〕。綜合本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，川芎超細(xì)微粉化入藥或進(jìn)行方劑的制劑工藝研究，是相對(duì)合理科學(xué)的。本研究亦為中藥的超細(xì)微粉化研究提供了一個(gè)新的思路。
參考文獻(xiàn)：
[1] 中華人民共和國(guó)藥典[S]北京：化學(xué)工業(yè)出版社. 一部，2000：30.
[2] 李儀奎.中國(guó)藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].上海：上?？萍汲霭嫔?1991：102.
[3] 尾崎幸弘.川芎的藥理和藥效[J].國(guó)外醫(yī)藥·植物藥分冊(cè).1994，9（4）：164
[4] 劉鷹翔.四甲基呲嗪和阿魏酸的抗炎作用[J].國(guó)外醫(yī)藥·植物藥分冊(cè).1993，8（2）：85.
[5] 肖 靜. 川芎嗪藥理研究的新進(jìn)展[J].華西藥學(xué)雜志，1993，8（3）：170.
[6] 北京制藥工業(yè)研究所.川芎有效成分研究：川節(jié)嗪的提取，分離和結(jié)構(gòu)鑒定[J].中華醫(yī)學(xué)雜志.1977，57（8）：420-421.
[7] 徐蓮英，陶建生.中藥制劑發(fā)展的回顧[J].中成藥.2000，22（1）：6.
[8] 劉產(chǎn)明，楊洪元.不同粉碎度三七體外溶出試驗(yàn)[J].中成藥.1998，20（2）：17.
[9] 杜曉敏，劉 璐，何 煜.生藥材超細(xì)微粉制劑的藥效學(xué)研究[J].中草藥.1999，30（9）：680.